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骈方沙巴体育制剂体外面对MDR细胞株K562/ADR和

时间:2018-11-07 08:43来源:未知 作者:admin 点击:
肿瘤细胞的多药耐药(multidrug resistance, MDR)即兴象临时以后到是肿瘤募化疗经过中的壹个顺顺手效实,是恶行性肿瘤治水疗中的壹父亲障碍.骈方制剂为骈方中药药剂学,我们临床发皓它

  肿瘤细胞的多药耐药(multidrug resistance, MDR)即兴象临时以后到是肿瘤募化疗经过中的壹个顺顺手效实,是恶行性肿瘤治水疗中的壹父亲障碍.骈方制剂为骈方中药药剂学,我们临床发皓它对恶行性肿瘤的募化疗拥有壹定的增敏、减毒干用,但其增敏干用机制不清.为此,本文终止了切磋.本切磋选用典型MDR细胞K562/ADR和K562/VCR耐药株(其耐药性却被Pgp按捺剂维弹奏帕米叛逆转).试验中,先采取MTT法,测试骈方制剂对叁株细胞的毒性干用,取其半数按捺剂(IC50)以下的四个浓度组:2.5、5、10、20(mg/ml),以维弹奏帕米干为阳性对照,不清雅察其对耐药细胞能否具拥有叛逆转干用.取具拥有壹定叛逆转干用的浓度组,运用流动式细胞技术,测定骈方制剂对耐药细胞积聚和外面排阿霉斋(ADR)的影响程度.

  方法:

  1.细胞培育: 细胞K562、K562/ADR、K562/VCR揪容例培育于RPMI-1640完整顿培育液中(含15%小牛血清,青霉斋100u/ml,链霉斋100u/ml).

  2.细胞抗药性试验--MTT法:取对数生临时细胞接种于96孔培育板内,每孔1×104(100ul/孔),区别参加以抗癌药或骈方制剂(FFTLG)、VCR(100ul/孔),置于二氧募化碳孵箱中, 37℃,培育72h后,按MTT法,用VICT0R 1420 MULTILABEL COUNTER比色计570nm波优点比色,寻求出产半数按捺浓度IC50及抗药倍数(Resistant Factor, RF).

  3.细胞抗药性叛逆转试验: 方法与细胞抗药性试验相反,条是在参加以抗癌药物前15 min 区别参加以VER(6ug/ml或 3ug/ml)、骈方制剂(FFTLG)2.5-20mg/ml,区别计算叛逆转倍数(Reversal Index, RI),试验重骈叁次.

  4.细胞内药物的积聚:将1×106/ml细胞与ADR(10ug/ml),37℃,120min,收集儿子细胞,配成1×106/ml细胞悬液用FACScan流动式细胞仪(FCM)测定细胞内ADR荧光强大度,以其荧光强大度恣意单位体即兴对立细胞内ADR浓度,试验重骈叁次.

  5.骈方制剂对细胞内药物积聚的影响:试验步儿子与测定细胞内药物的积聚试验根本相反,条是在参加以ADR前15min,参加以各种浓度的叛逆转剂.

  6.多方制剂对细胞内药物外面排的影响:将1×106/ml细胞与ADR(10ul/ml), 37℃,120min,用参加以骈方制剂后,区别在0 min、15min、30min、60min、90min时点,用FCM测定细胞内ADR荧光强大度,方法同上.

  7.测定给药处理后24h、48h、72h后两耐药细胞株P-gp表臻量流动式细胞仪法: 取对数生临时细胞接种于24孔培育板二块,每孔1×105(l ml /孔)区别参加以骈方制剂终浓度20mg/ml(1ml)VER终浓度6.ug/ml(1ml)空白对照组加以1ml培育液(置于37℃,5%CO2培育箱内)每组设9孔,24h后各组取3孔,(105个细胞/孔)处理测定P-gp含量(下流动式细胞仪测定),计录结实.48h、72h后处理经度过同上.

  8.统计学处理:均数比较用t检验.

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